ï»ż

Monitorering av TNF-alpha hÀmmare

Följande TNF-α hĂ€mmare kan testas hos Wieslab:

  • Infliximab: KoncentrationsbestĂ€mning och analys av ADA eller NAbs.
  • Adalimumab: KoncentrationsbestĂ€mning och analys av ADA eller NAbs.
  • Etanercept: KoncentrationsbestĂ€mning och analys av ADA eller NAbs.
  • Golimumab: KoncentrationsbestĂ€mning och analys av ADA eller NAbs.
  • Certolizumab pegol: KoncentrationsbestĂ€mning och analys av ADA eller NAbs.

AnvÀndningsomrÄde

TNFα-i har under mĂ„nga Ă„r betraktats som ett utmĂ€rkt behandlingsalternativ vid svĂ„ra kroniska inflammatoriska tillstĂ„nd. Erfarenheten visar att en stor del av patienter (60-70%) har ett utmĂ€rkt primĂ€rt svar pĂ„ behandling med TNFα-i preparat. Behandling med TNF-a-hĂ€mmare visar emellertid ocksĂ„ en stor variation mellan patienter, behandlingsdos och intervall mellan dosering. Följaktligen kan mĂ„nga patienter dra nytta av en individualiserad behandlingsmetod beroende pĂ„ deras respons pĂ„ det biologiska lĂ€kemedlet. Det visar Ă€ven att det fortfarande finns en betydande andel av patienter för vilka TNFα-i inte ger pĂ„visbar effekt (primĂ€r terapisvikt) eller patienter dĂ€r effekten av TNFα-i minskar över tiden trots en initial bra respons (sekundĂ€r terapisvikt) (Bendtzen 2011 och 2013, Vincent 2013).


Wieslab har valt att utföra analyserna genom att mĂ€ta den biologiska aktiviteten av lĂ€kemedlet vilket Ă€r terapeutisk avgörande. Om det visar sig att patienten har lĂ„ga koncentrationer av lĂ€kemedlet och/eller har utvecklat antikroppar Ă€r det bĂ„de av klinisk och ekonomisk relevans att göra justeringar i behandlingen med TNFα-i.

KoncentrationsbestÀmning

Analysen utförs med en in vitrorapportör-cell-linje (iLiteÂź) och mĂ€ter den mĂ€ngd lĂ€kemedel i ett visst serumprov som kan hĂ€mma TNF-α att signalera genom TNF receptorn pĂ„ cellerna (Lallemand 2011).

Via TNF-alfa signaleringen aktiveras en rapportörgen (Firefly Luciferase) och effekten av det producerande enzymet kan avlÀsas.

Metoden Àr mycket stabil och repeterbar och bygger pÄ att cellerna Àr stoppade i sin normala cellcykel. Den cellulÀra aktivitetsanalysen har en mycket god korrelation till klassisk koncentrations-mÀtning med radioimmunanalys (RIA) men mÀter i motsats till bindningsanalyser (RIA, ELISA, HMSA etc) aktivitet av lÀkemedlet, vilket Àr terapeutisk avgörande.

Test för neutraliserande anti-drug antibodies (NAbs)

Kortfattat visar NAbs-testet om antikroppar i patientserum kan förhindra TNF-α-hĂ€mmaraktivitet i en in vitro-cellmodell.


Analys för NAbs mot TNFα-i utförs endast om koncentrationen av TNFα-i aktivitet Ă€r <0.65 ”g/ml. Resultat anges som negativ eller som positiv med titer.

Test för anti-drug antibodies (ADA) mot TNF-α hĂ€mmare

DĂ„ patienten har mĂ€tbar, men lĂ„g, koncentration av lĂ€kemedel i blodet (0,65-10 ”g/mL) testas om patienten har utvecklat ADA’s (anti-lĂ€kemedels-antikroppar) eller inte.

Resultat anges som negativ eller som positiv.

Klinisk relevans

Normal eller hög koncentration av aktivt lĂ€kemedel utan behandlingseffekt ses hos patienter med en sjukdomsprofil som inte Ă€r driven av TNF-α.

Vid misstanke om sekundÀr terapisvikt trots normal eller hög koncentration av aktivt lÀkemedel kan det bero pÄ att provet inte har tagits vid Cmin.

DĂ„ koncentration av TNFα-i Ă€r under detektionsnivĂ„ finns risk att detta beror pĂ„ NAbs mot lĂ€kemedelspreparatet som hindrar TNFα-i att binda till TNF. Detta innebĂ€r i sin tur att TNF-alfa kan binda som normalt till TNF receptorerna.

DĂ„ koncentration av TNFα-i Ă€r lĂ€gre Ă€n förvĂ€ntat i serum men inga NAbs kan detekteras kan det bero pĂ„ compliance problem eller att patienten behöver en högre lĂ€kemedelsdos för att uppnĂ„ önskad behandlingseffekt.

LÄga koncentrationer av lÀkemedlet kan Àven bero pÄ att icke neutraliserande anti-lÀkemedels antikroppar har bildats mot lÀkemedlet. Dessa kan bÄde limitera biotillgÀngligheten (vid lokal administration av lÀkemedlet) och öka eliminering av lÀkemedel i cirkulationen.

ADA’s eller NAb’s korsreagerar inte mellan de olika TNFα-hĂ€mmarna

Individanpassad behandling

Monitorering av biologiska nivÄer hos enskilda patienter möjliggör optimering av behandlingseffektivitet genom att justera behandlingen beroende pÄ patientens specifika respons.

NÀr lÀkemedelsnivÄerna sjunker hos en patient utan respons, kan detta spegla bildandet av inaktiverande antikroppar riktade mot den biologiska behandlingen. Immunogenicitetstest identifierar nÀrvaro eller frÄnvaro av inaktiverande antikroppar, som styr nÀsta behandlingsbeslut - byt till annan biologisk behandling, dosminskning eller intensifierad dosering. Reducerad lÀkemedelsdosering hos vÀlmÄende patienter med relativt höga lÀkemedelsnivÄer minskar kostnaden. Ett individanpassat tillvÀgagÄngssÀtt kan förbÀttra behandlingens effektivitet och livskvalitet.

Princip för analyser av TNF-α monitorering pĂ„ Wieslab

Figur 1. Reporter Gene Assay

Rapportörcellerna i testet bĂ€r en TNFα inducerbar, NFkB reglerad Firefly luciferas rapporttörgenkonstruktion. NĂ€r TNFα sĂ€tts till rapportörcellen, aktiveras rapportörgenen via NFkB till att uttrycka Firefly luciferas. NivĂ„n av Firefly luciferas normaliseras i förhĂ„llande till nivĂ„n av Renilla luciferasgenen, som Ă€r under kontroll av en konstitutiv promotor i samma cell.


Figur 2.
Princip över mĂ€tning av TNFα-hĂ€mmar aktivitet.

Serum frĂ„n en patient som behandlas med TNFα-hĂ€mmare (TNFα-i) mixas med en förutbestĂ€md mĂ€ngd TNFα. MĂ€ngden TNFα-i korrelerar omvĂ€nt med mĂ€ngden luminesence (ljus).

Patientserum utan neutraliserande antikroppar

Patientserum med neutraliserande antikroppar

Figur 3. Princip för test av neutraliserande antikroppar mot TNFα-i.

Patientens serum mixas med en bestĂ€md mĂ€ngd TNFα-i (den TNFα-i som anvĂ€nds för behandling av den individuelle patienten) och inkuberas. DĂ€refter tillsĂ€tts denna mix till en förutbestĂ€md mĂ€ngd TNFα och celler.

Vid neutraliserande anti-lĂ€kemedels-antikroppar (NAbs) mot TNFα-i:
NAbs binder TNFα-i som dĂ€rmed inte kan binda till TNFα. Detta betyder att TNFα kan binda till TNFα-receptorn och ge normal aktivitet i cellen.

De grafiska elementen pÄ denna sida har sitt ursprung frÄn ARUP Laboratories i USA och anvÀnds med deras tillÄtelse.

Figur 4. Princip över Acid-EIA – antikroppar mot TNFα-i.

Före analys, behandlas proverna med syra och spÀds för att tillÄta upplösning av immunkomplex.

Denna process beskriver en EIA (enzymimmunoanalys) utformad för att bestÀmma nÀrvaro av bindande antikroppar mot TNF hÀmmare. Processen kan beskrivas som en sandwich-EIA.

 

LĂ€s mer om provtagning.

Fyll i och skriv ut Remissen - skicka in tillsammans med provmaterialet.
Vid fler frĂ„gor – vĂ€nligen kontakta oss.

För mer information om Therapeutic Drug Monitoring (TDM) var vÀnlig besök www.svarlifescience.com.

 

Relevant litteratur

 

  1. Bendtzen K. Personalized Medicine: Theranostics (therapeutics diagnostics) essential for rational use of tumor necrosis factor-alpha antagonists. Discovery Medicine, 15(83), 201-211 (2013).
  2. Bendtzen K. Is there a need for immunopharmacologic guidance of anti-tumor necrosis factor therapies? Arthritis Rheum. 63(4):867-870 (2011).
  3. Bendtzen K, Ainsworth M, Steenholdt C, Thomsen OO, Brynskov J. Individual medicine in inflammatory bowel disease: monitoring bioavailability, pharmacokinetics and immunogenicity of anti-tumour necrosis factor-alpha antibodies. Scand J Gastroenterol. 44, 774-781 (2009).
  4. http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/drugsatfda/index.cfm Labels information of individual TNF-inhibitors.
  5. EMA Committee for Medicinal Products for Human Use (CHMP). Guideline on immunogenicity assessment of monoclonal antibodies intended for in vivo clinical use. EMA/CHMP/BMWP/86289/2010 (2012)
  6. EMA Committee for Medicinal Products for Human Use (CHMP). Guideline on immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic proteins EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006. (2008)
  7. FDA Guidance for Industry. CDER/CBER. Assay Development for Immunogenicity Testing of Therapeutic Proteins. Draft guidance (2009).
  8. Jani M, Barton A, Warren RB, Griffiths CE, Chinoy H. The role of DMARDs in reducing the immunogenicity of TNF inhibitors in chronic inflammatory diseases. Rheumatology (Oxford). 2013 Aug 14.
  9. Lallemand C, Kavrochorianou A, Steenholdt C, Bendtzen K, Ainsworth MA, Meritet J-F, Blanchard B, Lebon P, Taylor P, Charles P, Alzabin S, Tovey MG. Reporter gene assay for the quantification of the activity and neutralizing antibody response to TNFalpha antagonists. J Immunol Meth. 373, 229-239 (2011).
  10. GarcĂȘs S, Demengeot J, Benito-Garcia E. The immunogenicity of anti-TNF therapy in immune-mediated inflammatory diseases: a systematic review of the literature with a meta-analysis. Ann Rheum Dis. Dec 1;72(12):1947-55 (2013).
  11. GarcĂȘs S, Antunes M, Benito-Garcia E, da Silva JC, Aarden L, Demengeot J. A preliminary algorithm introducing immunogenicity assessment in the management of patients with RA receiving tumour necrosis factor inhibitor therapies. Ann Rheum Dis. May 11. (2013)
  12. Tracey D, Klareskog L, Sasso EH, Salfeld JG, Tak PP. Tumor necrosis factor antagonist mechanisms of action: a comprehensive review. Pharmacol Ther. Feb;117(2):244-79. (2008)
  13. Vincent FB, Morand EF, Murphy K, Mackay F, Mariette X, Marcelli C. Antidrug antibodies (ADAb) to tumour necrosis factor (TNF)-specific neutralising agents in chronic inflammatory diseases: a real issue, a clinical perspective. Ann Rheum Dis. 72:165–178 (2013).
ï»ż